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工業(yè)葡萄糖常用的檢測方法是什么?

瀏覽量:350 來源:山東錦泰環(huán)境 時(shí)間:2024-9-25 9:14:06

信息摘要:

采用氣相色譜分析萄萄糖等多羥基化合物時(shí),由于多羥基化合物極性大、沸點(diǎn)高,直接進(jìn)樣分析無法進(jìn)行,所以多采用硅醚化試劑與羥基反應(yīng),生成易揮發(fā)、低極性、高穩(wěn)定性的三甲基硅醚衍生物,再進(jìn)行氣相色譜分析。

發(fā)酵過程常見工業(yè)葡萄糖檢測方法,如菲林滴定法、氧化酶一偶聯(lián)比色法(GOD POD法) 、氣相色譜法 、高效液相色譜法,旋光法、生物傳感器法。
菲林滴定法
原理:還原糖可以將菲林試劑中的二價(jià)銅離子還原為一價(jià)銅離子,反應(yīng)終點(diǎn)可以 由次甲基蘭指示(藍(lán)色消失形成磚紅色),根據(jù)一定量的菲林試劑完全還原所需的還原糖量,可計(jì)算加入樣品中的還原糖的含量。
1.試劑 菲林試劑甲液:稱取69.3g硫酸銅晶體,用蒸餾水溶解,定容至1000ml 菲林試劑乙液:稱取346g酒石酸鉀鈉,100g氫氧化鈉,用蒸餾水溶解定容至1000ml 次甲基藍(lán)溶液:1g次甲基藍(lán)溶于100ml水
2.儀器 水浴鍋。
特點(diǎn):手工操作,過程復(fù)雜,受到多種因素干擾,但是成本較低,所以目前仍為多數(shù)企業(yè)采用。
通過原理可以分析出本方法檢測結(jié)果其實(shí)是還原糖,而非絕對的葡萄糖量。
氧化酶一偶聯(lián)比色法
GOD-POD法即葡萄糖氧化酶法,可以用來測定葡萄糖。葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸,并釋放過氧化氫。過氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受體存在時(shí)將過氧化氫分解為水和氧,并使色原性氧受體
4-氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物,即Trinder反應(yīng)。紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。這一方法目前在臨床上用于診斷糖尿病。由于可自動化操作,因此未來也可能應(yīng)用于發(fā)酵液的檢測。
HPLC法
莫海濤等建立了同時(shí)測定葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖的高效液相色譜方法。樣品經(jīng)水超聲波浸取,采用Hypersil NH2柱分離,流動相為乙晴/水(二者體積比為80:20),用激光蒸發(fā)光散射檢測器檢測。結(jié)果表明:四者的線性范圍分別為15~1 000,20 --1500,15~1000,12~1 000mg/L,檢出限為4.5~6.0 mg/L,樣品的加標(biāo)平均回收率為92.9%~99.0%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9%~3.5%。與前者相比,HPLC檢測的準(zhǔn)確度和專一性更高。
旋光度法
在葡萄糖濃度與旋光度值的線性關(guān)系的考察中,精密稱取適量經(jīng)98~100℃干燥至恒重的純葡萄糖,加水溶解并稀釋,按照旋光光度法測定,旋光度a對濃度C回歸,得到的回歸方程。結(jié)果表明:當(dāng)葡萄糖質(zhì)量濃度為15.58~103.84 g/L時(shí),具有良好的線性 關(guān)系。
生物傳感器法
葡萄糖生物傳感器的工作原理如下:葡萄糖首先在GOD催化作用下生成過氧化氫,過氧化氫在過氧化物酶(HRP)的催化作用下,將2價(jià)還原態(tài)電介質(zhì)Os氧化成Os3+,氧化態(tài)電介質(zhì)Os3+在較低工作電壓下被還原,產(chǎn)生的還原電流與被測葡萄糖濃度呈線性關(guān) 系,通過檢測還原電流即可得到對應(yīng)葡萄糖濃度。
氣相色譜法
采用氣相色譜分析萄萄糖等多羥基化合物時(shí),由于多羥基化合物極性大、沸點(diǎn)高,直接進(jìn)樣分析無法進(jìn)行,所以多采用硅醚化試劑與羥基反應(yīng),生成易揮發(fā)、低極性、高穩(wěn)定性的三甲基硅醚衍生物,再進(jìn)行氣相色譜分析。